[實驗原理]

    大腸桿菌是含有長約3000Kb的環狀染色體的棒狀細菌，它能在僅含碳水化合物（如葡萄糖，提供碳源和能量）和提供氮、磷、微量元素的無機鹽的極限培養基上快速生長。如果用含氨基酸、核苷酸前體、維生素以及其它一些細菌不能合成的代謝成分的豐富培養基來培養，那么大腸桿菌會生長的更快。大多數應用于DNA重組技術的細菌是大腸桿菌K-12株的衍生菌株。

    當大腸桿菌在液體培養基中培養時，其開始裂殖前，先進入一個生長滯后期。在豐富培養基中，它能在20-30min內復制一代，這種指數生長相稱之為對數期。zui后，當培養基中的營養成分和氧耗盡或當培養基中廢物的含量達到抑制細菌的快速生長的濃度時，菌體密度就達到一個比較恒定的值。在通常的實驗室培養中，在這一時期的細胞密度一般為1*109—2*109ml，細胞停止迅速分裂。這就是細菌生長的飽和期，而所謂的新鮮飽和即指當培養液中細胞密度剛到達這一水平。

    培養特征是指微生物在培養基上所表現的群體形態和生長情況。細菌培養特征的常規檢驗包括平面上的菌落特征，液體培養時的生長特征以及斜面培養上的菌苔特征。菌落是個體微生物在固體培養基上生長繁殖成的肉眼可見的群落。在一定的培養條件下，不同的細菌形成的菌落形狀是不一樣的。

[儀器、材料與試劑]

(一) 儀器和材料

    超凈工作臺酒精燈 無菌培養皿及試管 接種環 無菌牙簽 涂布棒DH5α菌株

(二) 試劑

    LB液體培養基：每升含10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH

    LB固體培養基：每升含10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH、15g瓊脂糖

[實驗步驟]

（一） 在固體培養基中培養

    將已熔化的LB固體培養基冷涼到50℃左右（即熱而不燙手），按無菌操作倒入無菌培養皿內，冷卻凝固成平板，將涂布棒的三角部分浸沒于酒精中，取出后再通過燈焰，點燃其上的乙醇，待涂布棒上的火焰熄滅后，將其觸碰無菌瓊脂平板的表面使其冷卻。然后，取少許菌液（100uL）滴在平板上，用涂布棒作圓周運動將菌液涂布均勻，待平板干后于37℃倒置培養。待菌落長出后，觀察菌落特征

（二） 在液體培養基中培養

    取5mL液體培養基加入一支無菌試管中，用無菌牙簽挑一個單菌落浸沒于培養液中并輕輕振動，使待接種的細菌分散在培養液中，蓋好試管，在搖床上以60r/min于37℃培養至飽和（約6h），觀察液體培養物是否混濁。利用分光光度計監測，按每0.1 OD值大約相當于108細胞/mL計算細菌濃度。