研生試劑-常用佐劑的種類和制備

佐劑主要可分為兩種：一種本身具有免疫原性，如百日咳桿菌、抗酸桿菌（結核分枝桿菌）以及革蘭陰性桿菌等；另一種本身無免疫原性，如氫氧化鋁、磷酸鈣、礦物油乳劑、表面活性劑等。目前應用zui多的是弗氏佐劑(Freund adjuvant)。
    1．弗氏佐劑 弗氏佐劑是目前動物實驗中zui常用的佐劑，分為不*弗氏佐劑和*弗氏佐劑。不*弗氏佐劑是液體石蠟與羊毛脂混合而成，組分比為1～5：1，可根據需要而定，通常為2：1。不*佐劑中加卡介苗(zui終濃度為2～20mg/ml)或死的結核分枝桿菌，即為*弗氏佐劑。上述佐劑經高壓滅菌后，低溫保存備用。 
    在免疫動物前，先將弗氏佐劑與抗原按一定比例混合，制備成 "油包水"乳狀液。佐劑和抗原體積比一般為1：1。佐劑與抗原乳化可按如下方法進行：
  （1） 研磨法：先將佐劑加熱并取適量放入無菌的玻璃研缽內，待冷卻后再緩緩滴入等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續研磨一段時間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。本法適于制備大量的佐劑抗原，缺點是研缽壁上粘附大量乳劑，抗原損失較大。 
  （2） 注射器混合法：將等量的弗氏佐劑和抗原溶液分別吸入兩個注射器內，兩注射器之間以一細膠管相連，注意排凈空氣，然后交替推動針管，直至形成粘稠的乳劑為止。本法優點是容易做到無菌操作，適用于制備少量的抗原乳劑。 制備好的乳化劑經鑒定才能適用。鑒定方法是將乳化劑滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴狀浮于水面，即乳化*，為合格的油包水劑。
    2．氫氧化鋁佐劑 取5%硫酸鋁溶液250ml，在強烈攪拌下加入5%氫氧化鈉溶液100ml，用生理鹽水離心洗滌沉淀2次，再懸入生理鹽水中使達250ml。免疫接種時，取適量氫氧化鋁佐劑加等體積抗原即可免疫。 
    3．明礬佐劑 鉀鋁礬(硫酸鋁鉀)在一定pH條件下產生氫氧化鋁膠體吸附抗原而產生佐劑效應。制備方法是用生理鹽水溶解蛋白質抗原，在攪拌下緩慢滴入一定量10%硫酸鋁鉀溶液，用NaOH調pH到6．5，此時溶液變成乳狀懸液，離心后去掉上清液，沉淀用生理鹽水洗滌二次，加入硫柳汞防腐，4℃保存備用。明礬佐劑一般用于肌肉注射，皮下注射容易引起肉芽腫和膿腫。 
    4．脂質體 脂質體包封抗原后，可使抗原延緩釋放，并且脂質體顆粒有刺激機體免疫反應的作用。因此，用脂質體包封的抗原免疫動物可提高免疫效果。